PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局要點(diǎn)分析

PCR技術(shù)憑借特異性強(qiáng)、靈敏度高、對(duì)檢測(cè)樣品要求低、方便快捷等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于各種臨床診斷。PCR實(shí)驗(yàn)室是承載PCR技術(shù)應(yīng)用的設(shè)施，實(shí)驗(yàn)室的合理設(shè)計(jì)才能確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性，博泰小編帶大家了解PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局相關(guān)知識(shí)。

一、PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局要求

1、如果采用實(shí)時(shí)熒光PCR法，則擴(kuò)增區(qū)和分析區(qū)可以合并為一個(gè)區(qū)。

2、如果樣本在擴(kuò)增之前需要粉碎處理，則需要增加一個(gè)區(qū)域用于樣品的粉碎。

3、PCR實(shí)驗(yàn)室一般由試劑儲(chǔ)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)4個(gè)區(qū)域組成。

4、如果采用全自動(dòng)化PCR分析儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和分析區(qū)可以合并為一個(gè)區(qū)。

二、實(shí)驗(yàn)室功能與設(shè)備設(shè)計(jì)要點(diǎn)分析

1、試劑儲(chǔ)備區(qū)

該區(qū)域主要完成試劑和主反應(yīng)混合液的儲(chǔ)存、配制和封裝工作。所有運(yùn)送到該區(qū)域的試劑和材料不應(yīng)經(jīng)過(guò)其他區(qū)域，試劑和原材料應(yīng)在本區(qū)內(nèi)儲(chǔ)存和制備。本區(qū)域的氣壓應(yīng)相對(duì)外界保持正壓。該區(qū)域的設(shè)備主要是冰箱、天平、混勻器、低速離心機(jī)、加樣器、可移動(dòng)紫外燈等。

2、標(biāo)本制備區(qū)

該區(qū)域的功能是樣本的保存、核酸提取和貯存、樣本加入擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA的合成。樣本應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)并儲(chǔ)存在本區(qū)內(nèi)，不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域。對(duì)于氣流壓力的控制，由于在本區(qū)內(nèi)加樣操作可能產(chǎn)生氣溶膠，為避免氣溶膠擴(kuò)散出去對(duì)外界造成污染，本區(qū)應(yīng)對(duì)外界保持負(fù)壓;同時(shí)本區(qū)相對(duì)于擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)以及擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)為正壓，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。

3、擴(kuò)增區(qū)

該區(qū)域的功能是DNA擴(kuò)增和擴(kuò)增片段的測(cè)定。此外，反應(yīng)混合液制備成反應(yīng)混合液和已制備的DNA模板的加入等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。對(duì)于氣流壓力的控制，相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。

4、分析區(qū)

該區(qū)域的功能是擴(kuò)增產(chǎn)物的分析。該區(qū)域可能會(huì)用到某些可致基因突變的有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。對(duì)于氣流壓力的控制，該區(qū)域是PCR實(shí)驗(yàn)的最后一步，相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。